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本试剂盒提供独特的组分，采用特殊的非离子型去污剂，搭配数种磷酸酶及蛋白酶抑制试剂混合物，能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持结构完整，再用Lysis Buffer对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可适用于SDS-PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA、Pull Down和转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以从10⁷个培养细胞或200mg动物组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用50次。

• 提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA，转录因子分析的实验；
  
• 可以从50×10⁷个培养细胞或50×200mg动物组织提取核蛋白；
  
• 整个实验过程只需要45min左右；
  
• 在提取的过程中，最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染；
  
• 不需要超速离心，可以同时处理多个样品。

• 所有接触样品的用具及试剂均需预冷，以免蛋白质的降解与失活。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 由于不同蛋白质和不同的实验所需要的缓冲体系不同，提取后的蛋白质样品，如有必要，可透析除去其它一些盐份。
  
• 可以使用Sephadex重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
  
• 本试剂盒只提供磷酸酶抑制剂和PMSF，蛋白酶抑制试剂，可以根据实验的需要在Lysis Buffer和Hypotonic Buffer中加入一定浓度的其它蛋白酶抑制试剂，例如我司生产的（GS4715，GS4716或GS1525）。
  
• 对于提取的蛋白质可以采用我司生产的改良型BCA法蛋白质浓度定量试剂盒（GS1483）或非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒（GS1485）或改良型Lowry法蛋白质浓度定量试剂盒（GS1487）对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，请用我司生产的铜染（GS1532）或锌染（GS1534）或质谱用快速银染试剂盒（GS1419）对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液（GS1479）或高灵敏考马氏亮蓝染色液（GS1549）或通用型蛋白染色液（GS2027）进行染色。
  
• 使用后，请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能用于体外实验，不能用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 实体组织蛋白的提取
  
  • 向每1mL预冷的Hypotonic Buffer中加入5μL磷酸酶抑制剂，10μL PMSF和1μL DTT混匀，冰上静置待用。
    
  • 将100～200mg固体组织置于培养皿中，手术剪将小块充分剪碎，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用预冷的1X PBS洗涤两次，离心取沉淀后向其加入0.6mL已预冷的Hypotonic Buffer混匀，4℃环境下玻璃匀浆器手动匀浆30～50次至组织完全成匀质状液体无明显组织小块。
    
  • 转移至1.5mL预冷的离心管中，手指弹管壁使沉淀悬起，冰浴10min，振荡10sec混匀。
    
  • 将混悬液于4℃，800g (3000rpm)离心5min，立即弃掉上清，再加0.4mL预冷的Hypotonic Buffer振荡洗涤沉淀30sec，再于4℃，2500g (5000rpm)离心5min，弃掉上清，保留沉淀。
    
    • 在做步骤2~4的过程中，要保持动作的连续性，以免对细胞核的完整性产生影响。
  • 向沉淀中加入0.2mL Lysis Buffer (每1mL的预冷的Lysis Buffer中加入5μL磷酸酶抑制剂，10μL PMSF和1μL DTT）振荡将沉淀悬起，冰浴20min，再4℃，15000rpm (20000g)离心10min，弃掉沉淀，上清则为核蛋白提取物，分装后-80℃保存，避免反复冻融。
    
    • 尽量不要吸取到沉淀，以免影响下游的某些实验。
• 培养细胞蛋白提取
  
  • 对于贴壁培养的细胞，吸去培养基后，向150mm培养板中加入10mL预冷的1X PBS漂洗液洗两次，振摇数次后尽量将培养液去除干净。
    
  • 对于悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中，4℃，800g(3000rpm)离心10min，弃掉培养液，再加入10mL预冷的1X PBS漂洗液于4℃，800g(3000rpm)离心5min，重复洗两次。
    
  • 向每1mL预冷的Hypotonic Buffer中加入5μL磷酸酶抑制剂，10μL PMSF和1μL DTT混匀，冰上静置待用。
    
  • 向上述培养板或离心管的细胞中，加入配制好的预冷的Hypotonic Buffer，加入量如下表所示
    

    细胞数量	培养瓶或培养板的规格	Hypotonic Buffer加入量
    5×106个	60mm培养板或75cm2培养瓶	0.30mL～0.45mL
    1×107个	100mm培养板或150cm2培养瓶	0.60mL～0.90mL

  • 冷室或冰上操作，贴壁细胞用细胞刮子刮下或悬浮培养及裂解前刮下的贴壁细胞，连同Hypotonic Buffer转移至新的预冷的离心管中。
    
  • 手指弹离心管壁使沉淀悬起，冰浴10min，振荡10sec混匀。
    
  • 以下步骤同实体组织蛋白的提取中的A步骤4~5相同。